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黃尿酸(xanthurenic acid)ELISA試劑盒(競爭法)的原理與應(yīng)用是什么?

更新時間:2025-05-07      瀏覽次數(shù):422

黃尿酸(xanthurenic acid)ELISA試劑盒(競爭法)的原理與應(yīng)用是什么?

黃尿酸(xanthurenic acid)ELISA試劑盒(競爭法)的原理與應(yīng)用可總結(jié)如下:


一、檢測原理

采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),預(yù)先包被黃尿酸抗原的微孔板中依次加入樣本、標(biāo)準品及HRP標(biāo)記的競爭抗原,經(jīng)溫育洗滌后,通過TMB顯色反應(yīng)(藍色→黃色)實現(xiàn)檢測。樣本中黃尿酸濃度與顏色深度呈負相關(guān),最終通過測定450nm處OD值計算濃度.

二、樣本處理與保存

  1. ?樣本類型?:支持血清、血漿、唾液、尿液等。

  2. ?處理方法?:

    • 血清需避免細胞刺激,3000rpm離心10分鐘分離;

    • 其他液體樣本需去除雜質(zhì)后分裝凍存(-20℃或-80℃)。

五、注意事項

  1. ?保存條件?:未開封試劑盒需避光保存于2-8℃,開封后需按組分要求分裝;

  2. ?適用性驗證?:建議預(yù)實驗確認樣本稀釋比例及檢測線性范圍;

  3. ?檢測靈敏度?:競爭法通常靈敏度為10-50pg/mL,需結(jié)合超靈敏試劑盒(如化學(xué)發(fā)光法)檢測低濃度樣本。

文獻支持:

The Gut Microbiota-Xanthurenic Acid-Aromatic Hydrocarbon Receptor Axis Mediates the Anticolitic Effects of Trilobatin

影響因子:17.521


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結(jié)果判斷 

1. 15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值; 

2. 百分結(jié)合率計算:設(shè)S0管計數(shù)為B0,各標(biāo)準管或樣品管計數(shù)為B,非特異管計數(shù)為NSB,則百分結(jié)合率 計算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%

3. logit計算:各標(biāo)準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

4. 將標(biāo)準品的OD均值與標(biāo)準品0點的OD均相除,為標(biāo)準點的百分結(jié)合率,在log-logit坐標(biāo)紙上繪圖。 

5. Log-logit雙對數(shù)標(biāo)準曲線:坐標(biāo)紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位,第二個1-9表示 為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標(biāo)紙縱軸為百分比(1-99),即各標(biāo)準吸光值的百 分結(jié)合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上,同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣 品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率,再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點,此點對應(yīng)的橫坐標(biāo)濃度即 為樣品的濃度,無須換算。 

6. 人工處理:以標(biāo)準濃度取log值為橫坐標(biāo),對應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準濃度為橫 坐標(biāo),對應(yīng)的B/B0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準曲線(理想化時是一條直線)。根據(jù)待測樣品 的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標(biāo)紙,查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是最后的濃度 值。 

7.8. 9. 自動處理:使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式,由電腦自動計算得出結(jié)果。 敏感度:0.1 PPb。

試劑盒性能 

  1. 準確性:標(biāo)準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值,大于等于 0.9900。

  2. 靈敏度:檢測濃度小于 0.1 PPb。

  3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。





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