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豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答

更新時(shí)間:2020-07-27      瀏覽次數(shù):1622
   豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答
  豚鼠ELISA試劑盒操作流程如下:
 ?。?)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
 ?。?)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
 ?。?)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 ?。?)洗板,同(4)。
 ?。?)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 ?。?)洗板,同(4)。
 ?。?0)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
 ?。?1)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
 ?。?2)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
 ?。?3)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
  介紹一下豚鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作的常見問題。
  一、一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間?
  雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3.5-4小時(shí),競(jìng)爭(zhēng)ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。
  二、血清樣本如何處理?
  全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
  三、血漿樣本如何處理?
  建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
  四、細(xì)胞上清液樣本如何處理?
  檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細(xì)收集上清。
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